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类风湿性关节炎相关性自身抗体的研究进展

 

发布时间: 2016年05月03日   出处:检验科 余祥鹏    编辑:lsw    点击次数:4565

【摘要】:类风湿性关节炎(Rheumatoid Arthritis,RA)是是一种以关节滑膜炎为特征的慢性全身性自身免疫性疾病。在目前对RA的实验室诊断中,除了特异性较低的类风湿因子(RF)外,瓜氨酸的环肽(CCP),抗角蛋白抗体(AKA),抗铁蛋白抗体,抗聚角蛋白微丝蛋白抗体(AFA)等具有高度的特异性的的抗体被运用于临床对RA的诊断,并且这些特异性抗体能对RA病人的早期诊断,病情评估及预后都有这重要的作用,本文对一些常见的RA的自身抗体进行一些概要的介绍。


关键词:类风湿性关节炎 自身免疫性疾病 CCP GPI

    在我国类风湿性关节炎的患病率为0.32%~O.36%,发达国家的患病率约为1.0%[1]。男女比例为1:4左右,以中年女性为主[2]。类风湿性关节炎可伴有关节外的系统损害,其病理损害为关节的滑膜炎,有一定的遗传倾向,系多基因疾病,其发病原因可能是由病毒感染、体细胞基因突变等情况引起的免疫细胞异常、免疫调节功能紊乱而导致的一类疾病,其特点是患者对自身的组织产生异常免疫应答[3]。现行诊断标准主要依靠临床表现,X线检查以及类风湿因子(RF)的检测,但RF的特异性较差,不但在RA患者中出现,在其他的结缔组织病甚至一些正常人群中出来,而且符合此标准时患者常已出现骨关节的破坏,因此,临床需要能用于RA早期诊断的实验室检测指标。自抗核周因子(APF)是RA的特异性抗体并可在疾病的早期出现后,又陆续发现抗角蛋白抗体(AKA)、抗聚角蛋白微丝蛋白抗体(AFA)以及抗Sa抗体等都对RA都具有高度的特异性,并可在疾病的早期出现,这些抗体的表面都含有瓜氨酸称之为瓜氨酸相关自身免疫系统。

    1.类风湿因子(RF): RF是在滑膜的浆细胞内合成,IgG型的RF以免疫复合物的形式固定在组织内而不是以游离状态存在于血清中。是一种以变性IgG为靶抗原的自身抗体,主要在类风湿性关节炎患者的血清和关节液检出,它是一种抗变性IgG的抗体,属IgM型。可与IgGFc段结合。RA病人和约50%的健康人体内都存在有产生RF的B细胞克隆,在变性IgG(或与抗原结合的IgG)或EB病毒直接作用下,可大量合成RF。因此,类风湿因子在类风湿性关节炎病人中检出率是50%~80%。由于RF还可以在其他风湿性疾病、自身免疫性疾病、结缔组织病及3%~5%的正常人群中出现,其诊断RA的特异性大受影响。但RF作为目前RA应用最为广泛的抗体,在国际上还是被临床所承认。它具有一定的敏感性,但特异性较差[4]。

    2.抗核周因子(APF): 荷兰学者Nienhuis在RA血清中发现一种抗人颊黏膜细胞浆内角蛋白颗粒的抗体,由于这些抗体出现在细胞核周围。所以将其称为抗核周因子。它是一种对RA特异的免疫球蛋白,有IgG,IgA,IgM等类型,其中以IgG型为主。而我们通过间接免疫荧光法所测的APF抗体主要是IgG型,可在RA患者的血清和关节滑液中检出。APF阳性与病情相关,尤其是RF阴性的APF阳性患者,可作为RA的早期诊断。APF对RA具有较好的敏感性(50%~80%)和较高的特异性(89%一94%),Saraux等[5]研究指出约30%RF阴性的RA患者可以检出抗核周因子抗体[6],因此,该抗体在一定程度上可以弥补RF的不足,可以作为RA的血清特异抗体。

    3.抗角蛋白抗体(AKA): 角蛋白是一组不溶性的纤维蛋白,属于细胞骨架成分。1979年Young以大鼠食管1/3段为底物,用免疫荧光法检测抗角蛋白抗体,发现它是一种lgG型抗体,对RA具有很高的特异性(94%~98%) [7],但其敏感性相对APF和RF要低(40%一60%)。AKA可以在RA出现临床表现前检测到,与RA病情的严重程度相关[8]。AKA与RF、抗RA33、RA36抗体阳性无相关性,因此可作为后三者阴性的另一个诊断指标。AKA与疾病的严重程度及活动性相关,在RA发病早期和出现临床症状前都可检出阳性,故AKA为RA早期诊断和判断预后的良好指标之一。

    4.抗Filaggrin抗体(AFA): AFA广义是指能识别人的表皮角质蛋白聚集素和各种上皮组织角质蛋白丝相关蛋白的一类抗体的总称。抗Filaggrin抗体按其化学结构特点被称为角质层碱性蛋白,是一种碱性、带正电的蛋白,出现于上皮细胞的分化后期。它的前体是磷酸化的原聚角蛋白微丝蛋白。在胞浆的透明角质颗粒中聚集。在细胞分裂终末期由颗粒层向角质层转运过程中去磷酸化而降解成若干个filaggin,降解过程伴随碱性的精氨酸转化为中性的瓜氨酸。研究显示AFA对RA诊断的敏感度和特异度分别为36.13% ,93.14%[9]。均高于非RA疾病对照组和正常对照组。该研究提示,AFA对RA具有较高的特异度,可用于RA的临床诊断。有文献报道AFA是RF阴性RA预测关节侵蚀的有利补充。研究发现在RF阴性RA患者中29.2%AFA阳性,二者联合,无疑有利于RA的早期诊断,降低漏诊率[10]。

    5.抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体: CCP环瓜氨酸肽是APF、AKA、AFA的共同抗原决定簇,2000年在国外人工合成并将其抗CCP应用于实验。并将其用于ELISA的检测。Dubucquoi的研究表明,RA发病初期组和RA患者组的抗CCP的阳性率分别为65%和77%[11]。用ELISA法测定抗CCP有较高的敏感性和特异性。抗CCP可预测RA的发生,为早期诊断的另一可靠指标。它也可反应骨关节损害的程度,抗CCP阳性者的骨关节破坏程度较阴性者严重。因此.抗CCP是目前所知最有希望在今后全面推广应用的对RA早期诊断和观察骨关节损害的自身抗体。

    6.抗Sa抗体: 抗Sa抗体是1994年加拿大学者Despres[12]发现的一种主要为IgG型的自身抗体。Sa抗原是与核酸无关的非酰基多肽,主要存在于人脾脏、胎盘与关节滑翳中,可能是人体组织的正常组成部分。在关节破坏的RA患者中,该抗体的阳性率可达68.4%,对RA诊断的特异性为78%~97%[13]。抗Sa抗体在RA发病数月内即可从血清中测到,其滴度随病情活动而增长。因此,抗Sa抗体有助于RA的早期诊断并判断疾病活动性及预后。

    7.抗Ⅱ型胶原抗体: 临床上,在30% ~67%的RA患者血清及滑液中均可检测出Ⅱ型胶原抗体,而且与类风湿因子有较好的相关性。有研究发现在多数患者的抗Ⅱ型胶原抗体见于发病之初,甚至在关节软骨破坏之前,对于RA的诊断特异性可达97% ,故认为该抗体可作为RA的早期诊断指标之一[14]。在单关节及少关节受累的RA患者的血清中亦可检测出抗Ⅱ型胶原抗体。在其他一些关节炎,诸如痛风。在骨关节炎等患者血清中,抗Ⅱ型胶原抗体的阳性率很低。2006年徐建华等发现RA患者抗Ⅱ型胶原抗体阳性率明显高于健康对照组[15],且在早期RA患者中的阳性率(73.13%)高于晚期RA患者(24.1l%),同时抗Ⅱ型胶原抗体阳性组的血沉、C反应蛋白水平亦明显增高,反提示其可作为判断病情活动的指标之一。抗天然Ⅱ型胶原抗体可以作为RA的一个辅助诊断指标,有助于RA的早期诊断和预后的判断。

    8.抗p68抗体:1995年,BLAss等 从滑膜总蛋白中分离一种与RA相关的糖蛋白成分(GRP)一p68,并发现其抗体对RA的诊断具有较高的特异性。进一步研究发现,这种抗原是广泛表达的,在淋巴细胞、Hela细胞、肝组织等都可以检测到。其实质是一种内质网分子伴侣,也称免疫球蛋白结合蛋白Bip参与多肽出内质网时的正确折叠及转运,并与Ig重链和轻链的正确折叠、形成完整的Ig分子、细胞应激和凋亡有关[16]。以Hela细胞为底物,建立了IIF检测血清抗p68抗体的方法,结果抗p68抗体在RA的阳性率明显高于对照组,对RA 的敏感性、特异性分别为67.18% 、91.13% ;研究还发现,在病程<1年的RA患者中抗p68抗体的阳性率为69%,病程>1年的患者(54%),抗p68抗体与RA患者的病程、RF、关节x线分期有关,提示抗p68抗体可以在病程早期出现并且可能对RA的预后有判断意义[17]。另外,抗p68抗体可以在RF,CCP,HRF,RA33,AKA,APF等抗体阴性的血清中有很高的阳性率,在RA的诊断中,具有上述抗体不可替代的作用。综上所述,抗p68抗体检测在RA中具有很高的敏感性和特异性,见于大部分RF阴性的RA患者血清,出现在RA早期,对RA的预后判断有重要意义。

    9.抗钙蛋白酶抑素自身抗体:钙蛋白酶是一个可溶性的钙依赖半胱氨酸蛋白酶,能够降解结缔组织基质,在RA关节炎症与骨质破坏中起重要作用。钙蛋白酶抑素是特异性的钙蛋白酶抑制剂,广泛存在于各种细胞内,研究提示钙蛋白抑素系统参与了RA的发病。2004年,刘国文等通过Elisa法检测抗钙蛋白酶抑素自身抗体[18],结果显示抗钙蛋白酶抑素自身抗体在RA患者中的敏感度为82.18%,特异度为96.11% ,而在其他的结缔组织病患者的阳性率较低,如骨关节炎为81.3% ,SLE为51.3% .硬皮病为0%,故认为抗钙蛋白酶抑素抗体(ACAST)对RA的诊断具有较高的价值[19]。ACAST可出现在RA早期,故可作为RA的早期血清学诊断指标。

    10.葡萄糖-6-磷酸异构酶(glucose-6-phosphateisomerase):葡萄糖-6-磷酸异构酶最早在1968年因非球形红细胞溶血性贫血而得到认识,是糖酵解和糖异生的重要酶类,它除了具有酶活性之外还有细胞因子及生长因子活性。2002年,SCHUBERT等 报道了抗GPI抗体与RA相关[20]。但近年来有文献报道抗GPI抗体本身可能并不是RA的标志性抗体,但RA患者血清和关节液中明显增高的GPI可能对RA的诊断有帮助,或者成为RA患者病情活动的指标之一。研究人员推测GPI的细胞因子及生长因子活性可能对RA患者的血管增生滑膜增殖,骨破坏起了重要作用,同时增加了RA的易感性 。有研究表明GPI抗原对RA患者检测的敏感性为84.8%,特异性为98.6%[21]。另有研究表明通过ELISA方法检测RA患者血清中GPI抗原的浓度,发现RA患者组的GPI含量显著高于其他风湿病组及非风湿病组,而RA活动组和RA非活动组也有显著差异,并发现GPI浓度和RA疼痛和肿胀关节数呈正相关;通过反转录聚合酶链反应半定量检测PBMCs中mRNA的表达水平,结果发现GPI mRNA在部分RA患者中高表达,推测其可能在RA发病机制中起作用,并与疾病的活动性有关[22]。研究发现GPI与关节肿胀和疼痛数成正相关,而独立于抗CCP抗体、RF、CRP、ESR,这说明GPI在部分RA患者中升高是有一定特异性的。

    随着免疫学和分子生物学的发展,抗原纯化及检测方法将不断提高,抗Ⅱ型胶原抗体,抗p68抗体,钙蛋白酶抑素抗体(ACAST),抗BIP抗体等项目的检测既为RA的诊断提供新的诊断依据,更为RA发病机制的研究早期诊断提供了新途径,也有助于判断疾病的活动性、关节的磨损程度及预后。抗CCP抗体的发现,使人们对RA抗体谱的认识达到了一个新的高度,最重要的是找到了抗体间的内在联系,有助于对RA发病机理的研究。在抗CCP抗体可作为诊断RA的一个特异性指标,在测定的方法学上(ELISA)优于APF及AKA(免疫荧光法) [23],实验结果的可信度高,但是由于其敏感性较低,不适用于RA的筛选。而GPI在RA患者中的高表达有一定特异性,而且和关节的炎症状态有一定相关性。所以GPI对RA的诊断及活动性的判断有很大的临床应用价值,有可能成为RF和抗CCP抗体以外的一种标志物,从而增强RA诊断的敏感性和可靠性,或者和CRP一样,成为RA活动的指标之一。GPI很有希望广泛应用于RA的诊断及活动性的判断,具有广泛的临床应用及研究前景。今后对CCP及GPI的研究将能帮助我们确切的诊断RA、评价病情及指导治疗上的确切价值。


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